地衣酚显色法测定RNA含量

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文章关键词:公海555000赌船,地衣酚

  核糖核酸与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变为糠醛,后者与3,5-二羟基甲苯(地衣酚)反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂,反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20~250μg范围内,光吸收与RNA的浓度成正比。地衣酚反应特异性较差,凡戊糖均有此反应,DNA和其他杂质也能给出类似的颜色。因此测定RNA时可先测定DNA含量,再计算出RNA含量。

  一、RNA标准曲线和2.5mLRNA标准溶液。分别加入蒸馏水使最终体积为2.5mL。另取2支试管,各加入2.5mL水作为对照。然后各加入2.5mL地衣酚试剂。混匀后,于沸水浴内加热20分钟。取出冷却(自来水中)。于670nm波长处测定光吸收值。取两管平均值,以RNA浓度为横坐标,光吸收值为纵坐标作图,绘制标准曲线。

  取2支试管,各加入2.5mL待测液,(样品量应在标准曲线的可测范围之内),再加2.5mL地衣酚试剂。如前所述进行测定。

  根据测得的光吸收值,从标准曲线上查出相当该光吸收值的RNA含量。按下式计算出制品中RNA的百分含量:

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